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紫外分光光度法是根據(jù)物質(zhì)的吸收光譜，來(lái)研究物質(zhì)的成分、結(jié)構(gòu)和物質(zhì)間相互作用的有效手段。紫外分光光度計(jì)可以在紫外可見光區(qū)任意選擇不同波長(zhǎng)的光。物質(zhì)的吸收光譜就是物質(zhì)中的分子和原子吸收了入射光中的某些特定波長(zhǎng)的光能量，相應(yīng)地發(fā)生了分子振動(dòng)能級(jí)躍遷和電子能級(jí)躍遷的結(jié)果。
由于各種物質(zhì)具有各自不同的分子、原子和不同的分子空間結(jié)構(gòu)，其吸收光能量的情況也就不會(huì)相同，因此，每種物質(zhì)就有其特有的、固定的吸收光譜曲線，可根據(jù)吸收光譜上的某些特征波長(zhǎng)處的吸光度的高低判別或測(cè)定該物質(zhì)的含量。
紫外分光光度計(jì)用途
1、檢定物質(zhì)
根據(jù)吸收光譜圖上的一些特征吸收，特別是最大吸收波長(zhǎng)λ-max和摩爾吸收系數(shù)ε是檢定物質(zhì)的常用物理參數(shù)。這在藥物分析上就有著很廣泛的應(yīng)用。在國(guó)內(nèi)外的藥典中，已將眾多的藥物紫外吸收光譜的最大吸收波長(zhǎng)和吸收系數(shù)載入其中，為藥物分析提供了很好的手段。
2、與標(biāo)準(zhǔn)物及標(biāo)準(zhǔn)圖譜對(duì)照
將分析樣品和標(biāo)準(zhǔn)樣品以相同濃度配制在同一溶劑中，在同一條件下分別測(cè)定紫外可見吸收光譜。若兩者是同一物質(zhì)，則兩者的光譜圖應(yīng)完全一致。如果沒有標(biāo)樣，也可以和現(xiàn)成的標(biāo) 準(zhǔn)譜圖對(duì)照進(jìn)行比較。這種方法要求儀器準(zhǔn)確，精密度高，且測(cè)定條件要相同。
3、比較最大吸收波長(zhǎng)吸收系數(shù)的一致性
4、純度檢驗(yàn)
5、推測(cè)化合物的分子結(jié)構(gòu)
6、氫鍵強(qiáng)度的測(cè)定
實(shí)驗(yàn)證明，不同的極性溶劑產(chǎn)生氫鍵的強(qiáng)度也不同，這可以利用紫外光譜來(lái)判斷化合物在不同溶劑中氫鍵強(qiáng)度，以確定選擇哪一種溶劑。
7、絡(luò)合物組成及穩(wěn)定常數(shù)的測(cè)定：
8、反應(yīng)動(dòng)力學(xué)研究
9、在有機(jī)分析中的應(yīng)用
有機(jī)分析是一門研究有機(jī)化合物的分離、鑒別及組成結(jié)構(gòu)測(cè)定的科學(xué)，它是在有機(jī)化學(xué)和分析化學(xué)的基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)的綜合性學(xué)科。
紫外分光光度計(jì)使用注意事項(xiàng)
1、溫度和濕度是影響儀器性能的重要因素：
他們可以引起機(jī)械部件的銹蝕，使金屬鏡面的光潔度下降，引起儀器機(jī)械部分的誤差或性能下降；造成光學(xué)部件如光柵、反射鏡、聚焦鏡等的鋁膜銹蝕，產(chǎn)生光能不足、雜散光、噪聲等，甚至儀器停止工作，從而影響儀器壽命。維護(hù)保養(yǎng)時(shí)應(yīng)定期加以校正。使用紫外分光光度計(jì)應(yīng)具備四季恒濕的儀器室，配置恒溫設(shè)備，特別是地處南方地區(qū)的實(shí)驗(yàn)室。
2、環(huán)境中的塵埃和腐蝕性氣體亦可以影響機(jī)械系統(tǒng)的靈活性、降低各種限位開關(guān)、按鍵、光電偶合器的可靠性，也是造成必須學(xué)部件鋁膜銹蝕的原因之一：
因此，使用紫外分光光度計(jì)必須定期清潔，保障環(huán)境和儀器室內(nèi)衛(wèi)生條件，防塵。
3、紫外分光光度計(jì)儀器使用一定周期后，內(nèi)部會(huì)積累一定量的塵埃，最好由維修工程師或在工程師指導(dǎo)下定期開啟儀器外罩對(duì)內(nèi)部進(jìn)行除塵工作：
同時(shí)，將各發(fā)熱元件的散熱器重新緊固，對(duì)光學(xué)盒的密封窗口進(jìn)行清潔，必要時(shí)對(duì)光路進(jìn)行校準(zhǔn)，對(duì)機(jī)械部分進(jìn)行清潔和必要的潤(rùn)滑。最后，恢復(fù)原狀，再進(jìn)行一些必要的檢測(cè)、調(diào)校與記錄。分析儀器工作者要懂得儀器的日常維護(hù)和對(duì)主要技術(shù)指標(biāo)的簡(jiǎn)易測(cè)試方法，自己經(jīng)常對(duì)儀器進(jìn)行維護(hù)和測(cè)試，以保證儀器工作在最佳狀態(tài)。
紫外可見分光光度計(jì)詳細(xì)操作流程及校準(zhǔn)方法
1、紫外可見分光光度計(jì)光度測(cè)量
在模式選擇屏幕中選擇＜1.Photometric光度＞選項(xiàng)，將顯示參數(shù)配置屏幕；
用GOTOWL鍵設(shè)定測(cè)量波長(zhǎng)；
按F2鍵設(shè)定進(jìn)樣控制；
按START/STOP鍵時(shí)，測(cè)量開始，顯示測(cè)量屏幕；
如需做空白校正，應(yīng)在測(cè)量前先設(shè)置空白樣品，然后，按AUTO-ZERO鍵，將測(cè)量值置為OABS（100%）；
2、紫外可見分光光度計(jì)校正
開機(jī)預(yù)熱10分鐘足矣；
放入黑塊和標(biāo)樣（沒有的自己配），關(guān)閉蓋子；
校0；
把燈光對(duì)著黑塊，把透光度調(diào)0；
把燈光對(duì)標(biāo)樣，將吸光度調(diào)到100%；
3、參比溶液介紹
參比溶液又稱空白溶液。測(cè)量時(shí)用作比較的、不含被測(cè)物質(zhì)但其基體盡可能與試樣溶液相似的溶液。通常，用參比溶液掃描的曲線應(yīng)是一條平坦的直線。有時(shí)，基體中，雖不含被測(cè)物質(zhì)，但含有別的物質(zhì)，這時(shí)必須保證其不影響測(cè)試。經(jīng)常碰到的是試劑空白中含有被測(cè)物質(zhì)，此時(shí)必須經(jīng)過(guò)純化將其除去。否則將影響測(cè)定結(jié)果。
4、紫外可見分光光度計(jì)使用注意事項(xiàng)
①開機(jī)前應(yīng)先預(yù)熱15分鐘，然后開機(jī)自檢；
②濕度要控制在75%左右，溫度在5～30度之間；
③儀器要穩(wěn)壓電源，接地要好。并且避免陽(yáng)光直接照射；
5、常見故障及處理方法
光門不能完全關(guān)閉：修復(fù)光門部件，使其完全關(guān)閉；
透過(guò)率“100%”旋到底了。解決方法：重新調(diào)整“100%”旋鈕；
儀器嚴(yán)重受潮：可打開光電管暗盒，用電吹風(fēng)吹上一會(huì)兒使其干燥，并更換干燥劑
